Tkáňová kultura tipy

pro tkáňové kultury je propagace buněk v kapalném růstovém médiu v laboratoři pro různé vědecké účely. Například, jsou tkáňové kultury používají v diagnostice genetických onemocnění, jako médium pro pěstování intracelulárním patogenům, jako jsou bakterie a viry, nebo při vyšetřování buňkách samotných. Buňky tkáňové kultury

Některé buňky dodržovat dna Petriho misek, nebo i nadále pozastavena v kapalině. Buňky mohou být rostlinného nebo živočišného původu. Buňky používané v tkáňových kulturách může být primární buňky, což znamená, že byly sklizeny přímo z organismu, nebo z buněčné linie, která je udržována v kultuře. Buněčné linie jsou často rakovinné buňky, a to je třeba brát v úvahu při plánování nebo interpretaci experimentů.
Dopřejte Buňky Jemně

Adherentní buňky jsou odstraněny z jejich Petriho misky pro průchod do škrábání nebo proteázy, obecně trypsin a EDTA. Škrábání zabíjí mnoho buněk, a je třeba použít pouze při přípravě buněčné lyzáty (kapalné přípravky s obsahem buňky pro analýzu) nebo v případě, trypsin /EDTA musí být bezpodmínečně zabránit.

Trypsinizing odstraní nejen proteiny, které se řídí buňky do misky ale většina dalších proteinů na membrány buněk, příliš. Buňky míč a trvat nějakou dobu, obvykle přes noc, obnovit pouto s misky. Přidání minimální množství trypsinu - asi 1 ml na 25 cm2 baňky - houpací baňky po dobu pěti sekund nebo méně, aby nátěr se nárůst a pak proudí z nebo odsávání přebytečné trypsinu se sníží množství trypsinu, které se nárůst je vystavena. Nechte buňky odpočinek v inkubátoru při trypsinizací.

Po buňky sklouznout na dno misky, přidejte média se sérem a odsajte lyzátu nahoru a dolů pipetou opatrně. Nechte trochu média zůstat v misce, jak si pipeta nahoru a dolů několikrát k rozpadu shluků a získat i suspenze.

Nevysávejte bubliny do pipety. Také není energicky mix nebo víru buněčná suspenze;. Buňky jsou velmi křehké v této sevřené-up stavu
k ohřevu Neaktivní nebo ne k ohřevu Neaktivní

techniky buněčné kultury byly v plenkách, se fetální bovinní sérum (FBS) známo, že obsahují komplementu, které jsou proteiny imunitního systému, které lýzu buněk. Komplementu nejsou žádoucí v buněčné kultuře. Tepelná inaktivace FBS na 56 stupňů Celsia po dobu 30 minut, způsobí komplementu neaktivní. Předehřátí FBS na 37 stupňů Celsia je také dost inaktivaci komplementu.

V prvních dnech, tepelně inaktivovat FBS také zabil Mycoplasma a jiné nečistoty. V té době byl filtr sterilizace provedena s 0.45um filtry. Dnes se filtr sterilizovat FBS a médií přes 0.1um nebo dokonce 0.04um filtrů. Ne mycoplasma bude proklouznout tomto

To nás staví otázku, zda pro ohřev deaktivovat

Tepelná inaktivace degraduje všechny komponenty - FBS.. Jako jsou vitamíny, aminokyseliny a růstové faktory -. případně pod prahem pro některé vybíravé buněčných linií

Pokud pracujete s pomalu rostoucí nebo mlsný buněčné linie, považují pouze filtrovat sterilizaci vaše FBS. Možná zjistíte, zvyšuje se odolnost vašich buněk.