Biotinylace Protocols

Biotinylace je proces propojení biotin, nebo vitamin H, na protein, nebo jiné molekuly. Tento vědecký postup je většinou používán v biotechnologii a molekulární biologie výzkum zahrnující DNA, bílkoviny a antigeny, které jsou molekuly imunitní systém rozpoznat jako vetřelci. Biotinylace protokoly zahrnují Biotinylace protilátek a peptidů, stejně jako buněčný povrchový biotinylace. Biotinylace protilátek

Chcete-li propojit biotin na protilátky proteiny produkovat, když antigen vstupuje do těla, jaké používají technici hydrogenuhličitanu sodného (NaHC03) při pH 9, dimethylsulfoxid (DMSO);

NHS Biotin-a roztok látky zvané PBS. Vzorky se smísí s roztokem hydrogenuhličitanu sodného, ​​který se později přidal k NHS-biotinu v DMSO. Roztok se pak přidá do analyzovaných protilátky a inkubují se na část zařízení s názvem rotátor po dobu čtyř hodin při pokojové teplotě nebo přes noc při 39,2 stupňů Celsia. Nakonec se roztok se ředí PBS.
Povrchu buněk
Biotinylace

na Biotinylace povrchu buňky protokolu, jaké používají technici tkáňové kultury, ve fosfátovém pufru (PBS) při pH 7.4 a sulfosukcinimidyl-2-(biotinamido) ethyl-1 ,3-dithiopropionate pufr k vyrovnání kyselin obsahující aminoskupiny a TrisCl, podle Current Protocols in Protein Science.The buněk se smísí s biotinem a pufr, dekantuje a centrifugovány . Obsah pevné látky a specifické bílkoviny jsou později analyzovány na talíři gelové elektroforézy.
Biotinylace peptidy

vykonávat Biotinylace peptidů, použité činidlo je NHS Biotin-SS, podle Philipa Pastýře v "monoklonálních protilátek: praktický přístup." Peptidy jsou krátké fragmenty aminokyselin, molekul, které vytvářejí bílkoviny a DNA. V tomto protokolu je komerční řešení NHS-SS Biotin rozpustí ve vodě. Pak peptid vzorku se přidá k tomu, společně s roztokem hydrogenuhličitanu sodného, ​​aby vyrovnání kyselosti nebo pH. Roztok se pak inkubuje na ledu po dobu dvou hodin. Technici mohou pozorovat vzorku s nebo bez biotinu molekul.