Protokoly retrovirus Infekce

obsahující genom RNA, který je zapouzdřen v kapsidy a lipidů obálky, retroviry obsahují polypeptidových řetězců, které pomáhají propojit je s receptory v membránách hostitelských buněk, které nakazily. Vzhledem k tomu, dědičné Většina buněk "informace zakódovaná v DNA, které retrovirů je obsažen v RNA, retroviry také nést enzymu reverzní transkriptázy, což jim umožňuje držet hostitelské DNA. Některé protokoly jsou následně v laboratořích v účelné infekce DNA buňky s těmito viry. Příprava Laboratorní

některé laboratorní vybavení a zdroje jsou nezbytné k usnadnění procesu retrovirové infekce. Výbava zahrnuje 1 pipeta pomoc, 1 pipeta-man, 1 tkáňové kultury kapuce, 37-stupňů Celsia a 32-stupeň Celsia inkubátory, centrifugu Eppendorf a. Dodávky zahrnují talíře tkáňové kultury, jednorázové Pasteur pipety kvalifikované retroviru supernatantu filtrem sterilizovaný polybrenu a filtrem sterilizovaný protaminsulfátu.
Příprava buňky na infekci

​​
Prior k infekci, musí být rozdělena cílové buňky v tkáňové kultury desky a inkubovány přes noc v 37 stupňů Celsia inkubátoru s pěti procent CO2. Účelem inkubační doby je vytvořit buňky, které jsou 50% přítok. Příprava buněk předem je nutné zajistit, aby se buňky jsou optimalizovány pro infekčního procesu. Nolan laboratoř na Stanfordské univerzitě doporučuje, aby buňka infekce začínají vždy začít tím, že nakazí NIH 3T3 buněk pomoci optimalizovat výsledky testu.
Infikování buňky
< p> Po uplynutí inkubační doby je, měl by zajistit, výzkumníci, že buňky jsou obě zdravé a pravého soutoku. Pomocí tkáňové kultury kryt, je mobilní záležitost odsaje a virové supernatant se použije do buněk. Po nanesení destičku jemně houpala sem a tam, aby se zajistilo, že je rovnoměrně distribuován. Buňky se poté spin-naočkují vložením do Eppendorfovy odstředivky a odstřeďováním při 2500 otáčkách za minutu devadesát minut při teplotě 30 stupňů Celsia. Poté by měly být buňky inkubovány při 32 stupních Celsia po dobu jednoho až dvou dnů. Virus je poté nahrazen extrahovaných buněk a umístěna do inkubátoru má být analyzován, kdekoli tři-sedmdny po počáteční nákaze.