Parafín vkládání Protokol

Vědci obvykle nutné zpevnit biologické vzorky v sekci je pryč. To usnadňuje pro vědce přidat barviva, protilátky a sondy pro biologický vzorek. To také snižuje překrývání různých buněčných vrstev. Vědci používají parafín jako pevný matice pro řezání, neboť parafín se nemísí s vodou. Parafín je druh uhlovodíku. Biologické vzorky obsahují vodu, takže vědci musí vysušení vzorků pomocí stále více koncentrované etanolu koupele. Xylen

Vědci odstraňte etanol pomocí xylen. Pak tedy používají roztavenou parafin odstranit xylen. Pro světelnou mikroskopii, že parafínové preparáty jsou obvykle pět um silná. Parafín není dostatečně tvrdý pro tenčí plátky. Vědci rehydrataci tkáně pomocí xylenu, poté ethanol. Potom opláchněte biologický vzorek destilovanou vodou, aby se zabránilo kontaminaci.
Upevňovací

parafinové tkáně jsou obvykle fixovány neutrální vyrovnávací formalínu, což je komerční verze formaldehyd. To zahrnuje paraformaldehydu a metanol, který zabraňuje formaldehyd, převést do kyseliny mravenčí. Tenké plátky tkáně potřebují 48 hodin záznamu při pokojové teplotě pro optimální histologie, což je studium mikroskopické anatomie. V opačném případě bude tkáň ztvrdne a stane křehká. Před zpracováním je tkáň obvykle uložen v 70 procent etanolu při teplotě 4 stupňů Celsia.

Parafinové procesory

Vědci často používají parafínové procesory k odeslání tkáně prostřednictvím lázní, které se postupně k vysušení materiálu před horkou parafín můžete zadat přes tkání. Vědci spuštění procesoru přes noc. Procesor pouze ohřívá tkáně po určitou dobu, v závislosti na tkáni, aby sama o sobě nemá tvrdá a křehká. Procesor používá vakuum, které urychlí pronikání parafínu a odstraní vzduchové bubliny. Po zpracování, jsou uloženy v kazetách tkáně při pokojové teplotě.
Wax tání

parafin taje po dobu jedné hodiny před přidáním tkáně. Celá kazeta je umístěna do 65 stupňů Celsia parafinového lázni po dobu 15 minut. Za studena z hliníku chladič chladí parafín na 20 minut. Pokud jsou voskové praskliny nebo tkáně nejsou zarovnány správně, vědec roztaví parafínové a zopakuje.
Řezání

řezů tkáně, vědec dostane vodní lázeň na 35 až 37 stupňů Celsia. Voda je svěží a deionizované. Bloky jsou umístěny lícem dolů na bloku ledu nebo chladičem po dobu 10 minut. Čepel řeže blok do sekcí. Dva problémy, které mohou nastat, jsou chudí ribboning a fragmentaci vzorky. Když se vzorky fragment, voda je příliš horká. Zda blok není páska dobře, měli byste dal ji zpět na bloku ledu a zpevnit vosku před zahájením znovu.