Protokoly pro barvení Hoechst

Hoechst skvrny fluorescenční barviva používaná pro označování DNA a RNA pomocí fluorescenční mikroskopie a metod průtokové cytometrie. Hoechst 33258 a Hoechst 33342 ar nejpoužívanější těchto skvrn. Mají schopnost vázat na molekuly DNA, což jádra a mitochondria se fluorescenční pod ultrafialovým světlem. Protokoly pro barvení Hoechst je běžná praxe v biotechnologických laboratořích a genetiky, a zahrnují techniky obarvení buněk pomocí jak Hoechst 33258 a Hoechst 33342. Hoechst 33342 HSC barvení a kmenových buněk čištění Protokol

Tento protokol se používá pro barvení buněk z myší kostní dřeně. Technici připravit vzorek kostní dřeně s HBSS + solný roztok, pufr HEPES a fetální telecí sérum. Oni se točí řešení a přidat do předehřátého média DMEM. Hoechst skvrna se přidá. Řešení je umístěn v 98,6 stupňů Celsia ve vodní lázni za přesně 90 minut ohlásí Ústavu imunologie na univerzitě v Pittsburghu. Úseky DNA objeví světélkující pod cytometru.

Hoechst 33342 DNA barvením

Během tohoto protokolu, technici pozastaveno Hoechst 33342 skvrna v destilované vodě, přidáme 2 procenta fetální telecí sérum buňky vzorek, udržování pH na 7,2 pomocí roztoku pufru. Buňky se inkubují při 98,6 stupňů F na hodinu, a okamžitě analyzovány s kusem zařízení zvané cytometr.

Barevného DNA je pak viditelná a zářivky, podle University of Michigan zdravotnického systému.


detekce DNA pomocí DNA-vazebnou fluorochromem Hoechst 33258

používají protokoly kus zařízení s názvem spektrometr pro analýzu DNA a RNA segmenty. Technici používají Hoechst 33258 fungující řešení a lýtkové Thymus vzorků DNA. Jsou vhodné i jako oddělené řešení s využitím DNA vzorku a chemické látky zvané ethidium bromid. Později se porovnat výsledky obarvení buněk v obou médiích, použití spektrofotometru, podle Current Protocols in cytometrie.