TMRE Protokol

tetramethylrhodamin ethyl (TMRE) je "pomalý, lipofilní, kationaktivní fluorescenční barvivo reditribution" používaný v MitoPT ™ TMRE /TMRM membránovou mitochondriální potenciál Posouzení Kit, vyrobené imunochemie Technologies, LLC. Tento proces pomáhá zobrazit transmembránový elektrický gradient potenciálu v buňkách. Příprava testu
fotografie

protokol je jednoduché následovat, a trvá přibližně 20 minut zpracovat při teplotě 37 stupňů Celsia. V živé buňky použité v testu může trvat několik hodin a několik dní na přípravu k použití. Kontrolní buňky mohou trvat několik hodin na přípravu, neboť je třeba přimět k podstoupit apoptózu.
Protokol Část 1
buňky

Kultura na hustotu optimální pro apoptózy nebo oxidační stres indukce, podle konkrétní indukční protokol, ale ne vyšší než 10 (6) buněk /ml.
Protokol část 2

Současně čas, kultura non-indukované negativní kontrola buněčné populace (ve stejné hustotě jako indukované populace.
protokol Část 3

indukovat apoptózu nebo záměrně depolarize mitochondrie následující požadovaný protokol.
protokol Část 4

Připravte 1X Assay /promývacím pufrem.
Protokol Parts 5-8

Připravte 1 mm nebo 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM zásob. Za část protokolu 6, připravit 1:100 ředění 1 mm, nebo 01:20 naředění 0,2 mm MitoPT ™ TMRE /TMRM řešení pro stouply na vzorky buněčných kultur.

část protokolu 7, Barva buňky pomocí konečné 20-200 nM koncentraci MitoPT ™ TMRE /TMRM řešení.

části protokolu 8, analyzovat údaje.