Jak se připravit na agarové plotny

Molekulární biologie a bakteriologie pomocí agarové plotny s kulturou mikroorganismů, jako jsou bakterie pro experimentování. Agar je látka, která ztuhne, nebo gely, tekuté živné prostředí vyžaduje, aby byl mikroorganismus přežít a růst. Po převodu na agarové misce, bakterie rostou v různých kolonií (pokud roste v nízkých koncentracích), nebo (v případě, šmouhy pěstované ve vysokých koncentracích), a může být sklizena pro analýzu. Biologové připraví agarové plotny, jak tento proces vyžaduje přístup k laboratorní kvalitních chemikálií a strojů a dobrou znalost molekulární biologie a sterilní techniky. To, co budete potřebovat
rukavice
Laboratorní plášť
obličejová maska ​​
Bunsen hořák
Laminární kapuce
sterilní Petriho misky
10g bacto-tryptonu
5 g kvasnicový extrakt
15g agarózové
1 ml 1N NaOH
sterilní destilované vody
Skleněná láhev
Autoklávy páska
Autoklávy
doplňky, např. antibiotika jako ampicilin
Zobrazit další instrukce
1

Položit řádné ochranné prostředky, včetně rukavic, laboratorní plášť a masku a dekontaminaci všechny povrchy. Práce vedle Bunsenovým hořákem nebo s výhodou, ve sterilní laminárním proudění. Tím se zabrání škodlivým látkám ve vzduchu před pádem do agaru.
2

Vyjměte stoh Petriho misek z jejich obalu, ale šetřit na zabalení agarových ploten. Označte vnějšího povrchu misky (ne víko) s typem agaru a datum přípravy. Položte desky tak, jak v jedné vrstvě s víky odstraněny, aby nalévání agaru jednodušší.
3

Smíchejte BACTO-Trypton, výtažek z kvasnic a agarózovém spolu a pak přidejte hydroxid sodný (NaOH). Přidejte sterilní destilovanou vodou pro získání 1l živných médiích. Tento roztok se převede do skleněné láhve s nejméně 1,5 l objemu. Volně zašroubujte víčko láhve a označit datum výroby a jméno médií. Umístěte pás autoklávu pásky na láhve a sterilizovat v autoklávu po dobu 25 minut je. Nechte láhev cool ne nižší než 45 stupňů Celsia (nebo to ztvrdne předčasně), ale není vyšší než 50 stupňů Celsia. Můžete uložit lahví ochladí a ztuhne agaru při 4 stupních Celsia a teplý až zkapalněného. Pokud je to nutné pro konkrétní experiment nebo linii bakterií, přidejte vhodný typ a množství doplněk, jako jsou antibiotika. Pokud je médium příliš horká, budou doplňky zničena, tak pečlivě zkontrolujte teplotu média před pokračováním.
4

nalijte dostatečné množství agaru na polovinu naplnit misky, zatímco agar je ještě teplé a zkapalněný. Ujistěte se, že povrch je zcela pokryt. Nelijte příliš velké množství nebo nechat agar dostat na vrchol paraboly. Udržujte talíře ve sterilním prostředí tím, že se hořák Bunsen nebo laminární proudění kapuce běžet nepřetržitě. Nechte desky nastavit, a pak nahradit víčka.
5

Vysušte agarových ploten asi 30 minut až hodinu v troubě nastaven není vyšší než 37 stupňů Celsia. Případně můžete nechat v laminárním proudění po dobu tří minut, nebo na dekontaminovaného laboratorním stole v low-dopravní oblasti, která není průvan za den nebo dva. Sušení desky se zastaví jakoukoli bakteriální řešení umístěné na povrchu agaru od jednoduše ředění ven a sklouznutí, namísto vytváření kolonií, které se drží na agaru.
6

pečlivě ukládat desky v temnu při 4 stupňů Celsia. Stack sušené agarové plotny s jejich dna až vám umožní jasně vidět štítky a aby se zabránilo mikroorganismy a nečistoty z pádu na povrchu agaru a znečištění je. Vložte nádobí zpět do obalu, přikryjeme alobalem a pásky obaly zavřené. Označte zabalené desky s jejich obsahem a datum přípravy. Můžete ukládat desky pro až dva měsíce a měla zbavit se jich po tom.