TPA Čištění Protocols

tkáňový aktivátor plazminogenu, nebo TPA je typ serinové proteázy, což je protein schopný zničit krevních sraženin. TPA se nachází v buňkách, které pokrývají vnitřní cévy. TPA protokoly jsou součástí farmaceutického a lékařském výzkumu pro zdvih, stejně jako onemocnění srdce a plic, jako je plicní embolie a infarktu myokardu. TPA čištění se vztahuje na odpojení tohoto proteinu z jiných molekul prostřednictvím řady postupů, včetně chromatografie a elektroforéza. Čištění TPA z ledvin Hog ​​

Tento protokol používá ve studiích fibrinolýzy, proces rozdělování produktu koagulace fibrin, který se v souvislosti s vytvářením nádorů. Technici extrakt acetonu z TPA sušených vepřových ledvinách draselným acetátového pufru, pH 4,2. Poté se přidá síran amonný do buněk vyvolat precipitaci. Dodávají n-butyl-Sepharose na vzorky, které jsou pak analyzovány na chromatographer. Concanavalin je také přidán a chromatograph.y k oddělení různých proteinů se provádí.
Čištění TPA z ovarií čínského křečka a buňky E. coli

Protein je čistota Důležitým faktorem úspěchu biologické experimenty. Čištěný TPA je komerčně k dispozici, a tím šetří čas a vyhnout se riziku ohrožení experimentu v důsledku špatně vyčištěného roztoku. Tento protokol zahrnuje čištění procesy TPA v savčích a bakteriálních buněk. Technici urychlit vzorků buněk, filtrát je a provádět afinitu a gelové chromatografie analýzu. Později se analyzovat a porovnat výsledky před průmyslovou výrobu.
Výraz aktivního člověka TPA v E. coli

objasněny buněčné lyzáty jsou přidány do lysin - Sepharose, analyzovány v chromatographer a promyje roztokem chloru. Další vzorek je vložen do druhé chromatografické kolony obsahuje proteiny, které se váže k TPA s vysokou afinitou. Vzorek z druhého sloupce se smíchá s roztokem zinku-Sepharose. Výsledný protein zobrazí více než 90 procent čistoty, podle časopisu "Applied and Environmental mikrobiologie."