Jak mohu Line Up DNA pro analýzu?

Agarózovém gelu Elektroforéza je nejčastější způsob vizuální analýzou DNA fragmentů, což umožňuje technikům vizuálně rozpoznat fragmenty DNA na základě velikosti. Agarózovém gelu udržuje magnetické pole, a, protože DNA má záporný náboj, se pohybuje směrem k pozitivnímu konci magnetického pole. Menší fragmenty DNA rychleji pomocí gelu a větší úlomky pohybovat pomaleji. DNA fragmenty jsou fluorescenčně obarvené pomocí interkalační látky známé jako ethidium bromidem. To umožňuje pro srovnání několika elektroforéza vzorků DNA na gelu. Věci, které budete potřebovat
agarózovém gelu, 0,7 procenta na 2 procenta
Tris-EDTA boritanu (TBA), tris-acetát-EDTA (TAE), sodná sůl lithium acetát (LA), kyselina boritá (SB) pufru
ethidiumbromid
Gel Loading Dye
Gel zásobník
elektroforéza komora
Rukavice
ochranných brýlí
pipety
elektroforéza hřeben
Zobrazit další instrukce
Příprava 0,7 procenta agarózovém gelu
1

Naváží se 0,7 g agarózy prášku a pak umístěte do velkého (250 ml) Erlenmeyerovy baňky.
2

Přidat 100 ml z 1X (pravidelné síly) pufru (TAE, TBE, SB nebo LB pufr) do Erlenmeyerovy baňky obsahující prášek agarózový.
3

Mikrovlnná trouba nebo tepla pomocí Bunsen hořák po dobu přibližně jednoho minut, dokud se roztok stane čirým a agarózy nerozpustí.
4

Baňka se vyjme ze zdroje tepla a nechte ji vychladnout na 55 až 60 stupňů Celsia.
5

Přidejte 1 ul (mikrolitrů) s ethidium bromidu do chlazeného roztoku agarózy pomocí odpovídající velikosti pipety, obvykle 1 ml. Swirl řešením míchat.
6

Nalijte gel pomalu do gelu zásobníku se zajistí, aby žádné bubliny formace během tohoto procesu. Pokud nejsou dodávány i přehrady s gelovou zásobníku, použijte krycí páskou se vytvořit z nich.
7

Podat elektroforézy hřeben opatrně do gelu, zajišťuje pevnou pozici a ve správné orientaci. Elektroforéza hřebeny se mohou značně lišit v počtu zubů, které mají. Nechte gel sada pro přibližně 25 minut jízdy
8

ponořte gel ve stejném pufru použitého k přípravě agaorse řešení -., V tomto případě 1X vyrovnávací paměti. Ponořte gel až v 5 ml pufrem.

Příprava a nakládka DNA do agarózovém gelu pro analýzu
9

Přenos 5 až 10 ul váš vzorek (y) z jejich reakčních zkumavek na čerstvé trubek. V případě, že chcete využívat celý reakční směsi, čerstvé trubka není nutné.
10

Přidat 0,2 x pufru do každé z vašich čerstvých zkumavek s roztokem vzorku DNA pro nakládku.

11

Vyjměte elektroforézy hřeben pomalu, což zajišťuje, že nemusíte rozbít gel nebo vytvořit nějaký prostor mezi spodní gelu a gel zásobník.
12

Přidat pěti do 12 ul příslušného markerem DNA do první jamky vytvořené elektroforézy hřeben. Zda nebo ne marker DNA je vhodné, závisí na velikosti fragmentů čekáte od vzorku.
13

zatížení pět až 10 ul svých vzorků do zbývajících jamek a přidejte stejné množství stejného markerem DNA do finále dobře.
14

Umístěte elektrody do elektroforetické komory připojením vodiče do příslušných zdířek do komory a nastavte elektrodu 50-150 V.

15

Nechte gel spustit jednu až čtyři hodiny.
Analýza výsledků
16

Vyjměte gel z gelu komory a umístit buď v UV prostoru pro vizuální identifikaci, nebo dejte do stroje, který je schopen pořídit fotografii gelu.
fotografie 17

Změřte vzdálenost znaky migrace ve svých studní.

18

Spiknutí proti vzdálenosti, velikosti kapel na papíře grafu semilog a nakreslete přímku nejlepší.
19

výpočet vzdáleností vašich neznámých kapel.

20

Odhad velikosti vašich neznámých kapel čára, až ze vzdálenosti ujeté vaše neznámých kapel, které splňuje linii nejlépe hodí.
21

kreslit další čáru od tohoto setkávání se k velikosti ose.