PCR Základy

polymerázové řetězové reakce (PCR) je metoda replikace DNA. Tato metoda se nazývá po DNA polymerázy, enzym, který katalyzuje proces replikace DNA. Kary Mullis rozvinul techniku ​​v roce 1984 a získal Nobelovu cenu za chemii za svou práci v roce 1993. Aplikace PCR

aplikací
Společné PCR zahrnují DNA otisků prstů (ve kterém jsou fragmenty DNA izolované a porovnána s existujícími daty), analýza velmi malé množství vzorku (která umožňuje vědcům rekonstruovat vyhynulých organismů a zemřelých historické postavy) a diagnostika onemocnění (včetně virové DNA a výzkum rakoviny)
PCR komponenty

Nezbytné komponenty a činidla PCR reakce jsou:. genomová DNA (šablona replikovat), dva primery (jeden dopředu a jeden dozadu) doplňkem sekvence templátu DNA, reakce koktejl (včetně Taq polymerázy a pufr, který poskytuje životaschopný prostředí, ve kterém reakce nastává) a substrát pro enzym Taq . (nukleotidy, které vám pomohou "postavit" jednotlivé prvky)
Kroky PCR

Kroky reakce jsou: Denaturace (během níž je teplota zvýšil oddělit vlákna DNA šablony) Žíhání nátěru (při níž je teplota ochladí na podporu volně plovoucí primer sekvence dodržovat izolované směry DNA šablon) a rozšíření (během níž Taq polymerázy přilne k nátěru a použití zdarma plovoucí nukleotidů pro replikaci každé izolované DNA prvku šablony). Opakováním tohoto procesu několikrát se izolovat každé replikované sekvence z původního vzorku DNA. Každé opakování exponenciálně zvyšuje množství replikované DNA, dokud není dostatečné množství pro požadovaný experimentu. Pro optimální teplotě a dalších podmínkách, viz Yale univerzita je "Navrhování PCR programy" na zdroje níže.
Průběh PCR

reakce může také být popisován ve třech etapách : Zesílení (při které je DNA replikace exponenciálně), Level-Off (při které je polymeráza Taq ztrácí aktivitu), a plošina (v této době nemůže více vyrábět v současné reakce). Pro interaktivní ukázka PCR reakce, viz University of Utah "PCR Virtual Lab" ve zdrojích níže.