Přilnavé Buňky Protocol

Buňky v kultuře jsou buď formou kultivovány v suspenzi, jako je například krevní buňky nebo buněk, jako jsou fibroblasty, které vyžadují, aby povrch, který se může dodržovat. Některé z povrchů může vyžadovat lakování v různých extracelulárních matric v závislosti na typu buňky a studium. Všechny buněčné kultury vyžadují jsou prováděny v aseptických podmínek. Optimální prostředí

Většina buňky mohou být kultivovány v médiu Dulbecco modifikovaném Eagle, (DMEM) nebo Roswell Park Memorial Institute (RPMI) s přídavkem 10 procent fetálního telecího séra, 2 z milimoles aminokyseliny glutamin a antibiotika, například, 100 jednotek penicilinu a 0,1 mg na ml streptomycinu. Buňky jsou uchovávány v jejich médiích ve zvlhčené inkubátoru při 37 ° C a 5 procent oxidu uhličitého.
Rozdělení
Buňky

by měly být kontrolovány denně infekce, smrt nebo růst . Jakmile se tkáňové kultury baňka je 80 procent pokryté v buňkách, by měly být buňky rozděleny na udržení zdraví buněk se a logaritmické fázi růstu. Media se odstraní a buňky se promyjí ve fosfátovém pufru. Adherentní buňky vyžadují přidání trypsinu a ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA), k odstranění proteinů buněčné adheze. Jemné míchání by měla odstranit buňky. Média musí být přidán k neutralizaci trypsin /EDTA řešení.
Subkultury

naředěné buňky a tryspin /EDTA lze odstředí, aby se pelety a praní buňky. Buňky mohou být znovu suspenduje v médiích a zředí a replated do nových lahví. Pokaždé, když se buňky rozdělí buňky průchod číslo se zvýší o jednu.
Media Změnit

Média by měla být změněna dvakrát týdně po odstranění starých médií a nahrazuje se nový, zahřeje médií.