Klonování genů a genové amplifikace (PCR)

encyklopedie onemocnění [rodinného lékařství]
genové klonování a amplifikace genu (vrchol ČR)
genové klonování a amplifikace genu (PCR ) Vysvětlím klonování genů a amplifikaci genu (PCR).
autor: Hyogo College of Medicine komentářem (sloupce)
klonování genu
Human Genome Project, která byla vyhlášena v prosinci 2004 u profesora genetiky vzdělávání Yoshihiro Yamamota
gen klonování a amplifikace genu (PCR) Celkový počet lidských genů se odhaduje na přibližně 22 000. Vyndání DNA z lidských buněk je snadné, ale odhalit fungování jednoho z genů mezi nimi, ne je tak můžete dělat cokoliv. Je nezbytné oddělit fragmenty DNA nesoucí požadovaný gen a zesílit ho. Jedná se o metodu nazvanou klonování genů, která používá vektor, který je DNA, která může být v buňce vynásobena. DNA rozdělíme na malé fragmenty restrikčními enzymy a spojujeme je s vektorem, aby se vrátili do hostitelských buněk. Fragmenty DNA obsahující požadovaný gen v tomto stadiu jsou odděleny od většiny jiných nežádoucích DNA. Dále, rostoucí hostitelské buňky (rekombinantní) nesoucí rekombinantní DNA mohou také zesilovat požadovanou DNA. V bakteriích a podobně jsou strukturní geny s informacemi o aminokyselinové sekvenci DNA jedné vazby. Ještě se vrátit do vhodných hostitelských buněk, připojených k jeho objednávky vektoru, protože gen je protein vytvořit mRNA je produkován, zda požadovaný gen mohl být klonován najdete poměrně snadné.
Nicméně od genu, jako je člověk, je intron, který nemá informace o aminokyselinové sekvence, větší, jako celek, bude také překážkou je klonování genu exony jsou od sebe odděleny. Proto se používají prostředky, jako je klonování fragmentu DNA obsahujícího exon s vektorem a poté selekci rekombinantní DNA, která odpovídá mRNA.
Dále, protože hotový mRNA neobsahuje introny, DNA k němu odpovídající z mRNA (komplementární DNA: cDNA) mít metoda také použita, že klonování se syntetizuje za použití enzymu. Pokud může být cDNA požadovaného genu oddělena, může být vyšetřena k určení aminokyselinové sekvence proteinu produkovaného genem.
klonování genu z vyšších organismů, jako jsou lidé, a metody, které přímo tímto způsobem z DNA, byly nepřímé metody, že plechovka zhotoven z mRNA, kompletní obraz genů z obou studiích bylo zjištěno, To je.
Gene amplifikace (PCR)
Jakmile mohou být klonovány geny, je poměrně snadné určit nukleotidovou sekvenci, která je genetickou informací DNA. Jakmile znáte nukleotidovou sekvenci, můžete amplifikovat a zkoumat pouze konkrétní část DNA metodou PCR.
Pro PCR je zapotřebí dvou typů syntetické DNA (primeru) o délce 20 až 30 nukleotidů. Stanovte primery se stejnou sekvencí jako nukleotidová sekvence každé dvojvláknové DNA známé sekvence na obou koncích části DNA, která má být amplifikována. DNA polymeráza extrahovaná z tepelně rezistentních bakterií žijících v horkých pramenech atd. Může dlouhodobě replikovat DNA po dlouhou dobu i při teplotě blízké 100 ° C. DNA obsahující
byly odstraněny z buněčné šablony (Igata), které dva primery a tepelně stálé DNA polymerázy Některé zkumavky, a nastavení přístroje lze ovládat teplotu a čas. Například přidání 30 sekund teplota 94 ° C, DNA se vloží jako templátu se dělí na jednovláknovou rozštěpeného vodíkové vazby. Když se ochladí na teplotu 55 ° C, primer bude vodíkově vázán s odpovídající DNA templátu a částečně bude mít dvojvláknovou strukturu. Zvýšením teploty na 72 ° C, vhodné pro reakce termostabilní DNA polymerázy zahájit syntézu DNA z vázaného místa primeru. Tento 94 ℃ 55 ℃, který se provede 30 cyklů 72 ° C, a pak amplifikovány několikrát miliónkrát pouze DNA část zájmu. Aniž by komplikovaný způsob
klonování genu, to je PCR, které mohou být odděleny amplifikaci pouze požadované DNA z malého množství templátové DNA. Například extrakci DNA jako templátu část rakovinné tkáně, jako je například, že pro amplifikaci genu, který je příčinou PCR Degan stanovena jeho nukleotidová sekvence, najít mutace vyskytující Některé z genu Budete to moci udělat.
stejně jako genetická diagnostika, které posoudí mutaci genu, která způsobuje různé nemoci, jakož i geny zodpovědné za genetické choroby, aby způsob podle tohoto PCR je.